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你知道如何配制LB培養(yǎng)基嗎?

  培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料。那么LB培養(yǎng)基是什么培養(yǎng)基?LB一般被解釋為L(zhǎng)uria-Bertani,然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說(shuō)法,這個(gè)名字來(lái)源于英語(yǔ)lysogeny broth,即溶菌肉湯。LB培養(yǎng)基是近年來(lái)用于培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌)的常用培養(yǎng)基之一。

  LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的培養(yǎng)基,生化分子實(shí)驗(yàn)中一般用該培養(yǎng)基來(lái)預(yù)培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴(kuò)增,達(dá)到使用要求.可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。

  LB培養(yǎng)基是一種應(yīng)用*泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,有時(shí)又稱普通培養(yǎng)基,含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。

  酵母提取物:酵母經(jīng)破壁后將其中蛋白質(zhì)、核酸、維生素等抽提,再經(jīng)生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的淡黃色粉末,其中氨基酸含量30%以上,總蛋白50%以上,核苷酸10%以上,廣泛用作生物培養(yǎng)基和食品調(diào)味品制造原料。

  胰化蛋白胨:一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨,是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化,濃縮干燥而成的白色粉末,含有豐富的氮源、氨基酸等。

  酵母提取物為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽、生長(zhǎng)因子、維生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生長(zhǎng)環(huán)境(如滲透壓),其次是提供無(wú)機(jī)鹽。

  在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96℃時(shí)溶化,一般實(shí)際應(yīng)用時(shí)在沸水浴中或墊以石棉網(wǎng)直接煮沸溶化。瓊脂在40℃時(shí)凝固,通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。

  由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌,因此,要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性,以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。

  LB培養(yǎng)基配制方法:

  配制每升培養(yǎng)基,應(yīng)該在950 ml去液態(tài)lb培養(yǎng)基離子水中加入:胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)溶解。用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0。用去離子水定容至1L。在15psi高壓下蒸汽滅菌20min。

  LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣,加15g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗固態(tài)LB培養(yǎng)基生素,并且倒好板。

  1.配制:100ml LB培養(yǎng)基加入1.5g瓊脂粉。

  2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養(yǎng)基置與55℃的水浴中,待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(shí)(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過(guò)高導(dǎo)致抗生素失效,并充分搖勻。

  3.倒板:一般10ml倒1個(gè)板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后,打開蓋子,在紫外下照10-15分鐘。

  4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個(gè)月內(nèi)使用。 配400ml的話成分按比例減少就行了,pH還是要按規(guī)定的。

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